Pionnier de la philosophie réaliste, il pensait que tous les hommes étaient mauvais et suivaient leur penchant à la moindre occasion. En tant que diplomate florentin, il voyagea en France, en Espagne et à Rome entre 1499 et 1512 . Il rencontra Cesare et écrivit : "Je ne lui trouve aucun péché." Il le suivit jusqu'en 1500, année où il prit la tête des Assassins. A cette même époque, il fait la connaissance d'Ezio et les deux hommes réussiront à développer une sorte d'amitié sous fond de cynisme et confiance réciproque.

Machiavelli est un personnage qui n'a qu'une grande confiance uniquement en soi-même. Bien qu'il fasse parti de la Confrérie des Assassins et lui est des plus fidèles, il agit souvent en solitaire ce qui peut, parfois, porter à préjudice vis-à-vis de ses actions pas toujours très catholiques. Par le passé, il aurait eu une relation avec Cesare Borgia.

Fils de la maîtresse de Rodrigo Borgia, Vannozza, il a étudié le droit. A dix-huit ans à peine, il était déjà Cardinal grâce à l'appuie de son père. Malgré sa soif de pouvoir sans précédent, Cesare se révèle être un général talentueux et un fin stratège. Sa confrontation avec Ezio va le pousser dans les moindres de ses retranchements, le rendant de plus en plus fou au point de tuer son père et de s'en prendre à sa propre soeur. Il meurt, non pas tué par Ezio, mais jeté par l'assassin du haut de la tour à Viviana.

Cesare est un mystère entier pour son entourage : ses pensées sont impénétrables et ses actions imprévisibles. Il voue une admiration et un amour malsain incestueux à sa soeur, Lucrezia, et est en constant conflit avec son père.

Malfatto était connu à Rome pour tuer massivement les courtisanes, ne laissant que des corps ensanglantés dans la rue. César envoya une ancienne courtisane lui remettre une lettre de sa part afin qu'il travaille pour lui – ce que Malfatto semble avoir accepté. Ezio a vent des agissements du docteur en découvrant le corps d'une des courtisanes de la Rose Fleurie. Guidé par les courtisanes, Ezio trouva Malfatto et envoya une de ses recrues le tuer.

Sous couvert d'être un barbier, Baltasar tâchait de s'informer sur les Assassins, utilisant un des sénateurs de César comme appât. Notant les techniques utilisées par les Assassins, Baltasar forma son propre « Assassin » : Il Lupo. Trahie par son ancienne collègue, Fiora, qui avait rejoint le camp des Assassins, Baltasar piégea sa planque échappant ainsi aux Assassins venus le chercher. Il laissa néanmoins un message à Fiora, l'incitant à venir le retrouver pour discuter. Mais ce n'était qu'un piège de plus dans lequel Baltasar espérait tuer son ancienne collègue. Le piège se retourna contre lui et ses alliés qui furent décimés par les Assassins.

Il Lupo fut formé par Baltasar et Fiora suite à leurs observations au sujet des Assassins. Il copia ainsi aussi bien la tenue que les techniques de combat, jusqu'à une copie de lame cachée. Après sa formation, Cesare Borgia l'envoya lui-même en mission. Recevant un message de Fiora après sa trahison, Il Lupo se rendit au lieu de rencontre mais tua l'Assassin amené par Fiora, se contentant de préciser à la jeune femme qu'elle était suivie. Mais celle-ci l'empoisonna, le laissant la maudire avant de mourir.

Après avoir perdu son unique enfant, Lanz est tombé en dépression et s'est engagé chez les Cento Occhi, groupe de bandits connus pour leur cruauté. Il devint rapidement chef du gang, se spécialisant dans une méthode bien particulière : pousser les gens dans le vide. Il fut ensuite au service des Borgia, ces derniers gardant le silence sur ses crimes en échange. Ezio a vent des agissements de l'homme en découvrant une femme sur un des toits de Rome : l'épouse de Lanz. Pour empêcher son suicide, il traque Lanz et l'assassine.

Suisse de par sa naissance, Auguste œuvra dans son pays en tant que mercenaire. Chassé ou en manque de sensation, il partit s'installer à Rome où il travailla en tant que forgeron auprès des marchands, jusqu'à son entrée au service des Borgias. Son habilité et son intelligence lui permirent de devenir le forgeron attitré des Templiers, mais surtout de dessiner des affiches de propagandes. Dévoué à son travail, Auguste pouvait passer des heures sur une affiche ou une arme avant de la considérer comme réussie. Son dévouement coûta sa perte. Apprenant que quelqu'un détruisait ses affiches, Auguste sortit de son atelier pour punir le coupable. Il fut tué par Ezio Auditore, en 1503.

On ne sait rien de la vie de Lia avant 1497, date à laquelle elle commence à servir Cesare. Fine contrebandière, elle lui fournissait divers objets rares via Fiora Cavazza, "La Courtisane" envoyée par Cesare pour mener les transactions. Lia ne s'en souciait guère, cherchant avant tout à être payée à la hauteur des services qu'elle rendait.

Parfois Lia devait faire couler le sang. Ce fut le cas en 1503, Cesare lui ayant donné l'ordre de tuer un commerçant qui refusait de fermer son commerce malgré les nouvelles lois. Lia réussit sa mission, mais fut prise par surprise par Ezio Auditore. Malgré la course-poursuite qui s'engagea, la Contrebandière n'eut pas le temps de s'enfuir.

Donato ne se fait véritablement remarquer qu'en 1503 lors d'une course de chevaux organisés par les Borgia. Cesare devant être le vainqueur, Fiora "La Courtisane" se rendit auprès de Donato afin de le pousser à perdre. Loin de broncher, l'homme laissa juste entendre que rien ne l'empêcherait de gagner. Un autre Templier, Teodor Viscardi, tenta de le désarçonner durant la course mais sans succès - Donato déjoua le piège et gagna haut la main. Il fut tout de même violemment battu par les mercenaires de Borgia, en guise de punition.

Féru de courses, Donato continua à en mener malgré l'incident. Battu par un simple marchand, le capitaine Donato voulut laver l'affront. Détruisant l'étal du marchand, il le menaça de mort. Menace qui arriva aux oreilles d'Ezio Auditore qui mit fin à la vie du capitaine alors qu'il entrainait ses soldats.

Surnommé "L'Ingénieur", Gaspar œuvrait pour le compte de Cesare en créant de la fausse monnaie et des équipements. En 1503, il dut combattre un groupe de citoyens tentant de former une résistance contre les Borgia. Usant d'une arquebuse, il tuait les manifestants à distance et en grand nombre. Cependant Ezio Auditore fut sur les lieux, et réussit à tuer Gaspar qui s'enfuyait.

Vers 1500, Cesare cherchait de nouveaux alliés pour nourrir sa cause. C'est ainsi qu'il eut connaissance du frère Ristoro à qui il demanda de lui fournir icônes religieuses et amulettes, mais surtout des lettres de condamnation officiellement signés par l’Église (mais falsifiés par Ristoro). En échange Cesare lui offrait des jeunes filles afin de satisfaire ses "appétits". Loin de suivre ses vœux, le frère aimait fréquenter la maison close la plus populaire de Rome, terrifiant les courtisanes par ses goûts. L'une d'elles fut Fiora Cavazza, qu'il tenta encore de séduire alors qu'elle lui menait des filles de la part de Cesare.

Les fautes du frère Ristoro n'échappaient pas à ses frères. Deux d'entre eux l'interrogèrent sur ses pratiques - ils furent tous deux empoisonnés. un troisième harangua la foule afin de faire connaître la vérité; interrogé par Ezio Auditore, le frère lui donna l'emplacement du monastère.

C'est au sein même du lieu sacré, pourtant protégé par les Borgia, que Ristoro perdit la vie.

Prétendant être un grand seigneur, Silvestro n'était qu'un marchand d'esclaves au service des Borgias. Ayant échoué dans une de ses missions, il eut le bras gauche tranché en guise de punition. Depuis il l'a remplacé par un curieux système - sûrement une invention de Gaspar de la Croix.

Le travail de Silvestro consistait à enlever les habitants de Rome (femmes, hommes et enfants) et de les expédier hors de la ville, afin de les vendre comme esclaves. Il aurait pu longtemps continuer ainsi si Ezio Auditore ne l'avait pas tué - et cela simplement parce qu'il avait enlevé la mère et oublié le gamin.

Travaillant au service de Cesare, Il Carnefice était surtout connu pour être le bourreau le plus sanguinaire de tout l'Italie. Ainsi l'un de ses grands plaisirs était d'afficher les corps suppliciés des condamnés. Personne n'avait le droit de les ôter, à part lui.

C'est ainsi qu'il menaça un mari d'être exécuté s'il tentait de récupérer le corps de sa femme. Il Carnefice n'avait pas prévu la venue de l'assassin Ezio Auditore qui vint le tuer dans sa propre demeure, afin de libérer le peuple de son joug.

Courtisane au sein de la Rosa in Fiore, le plus grand bordel de Rome, Fiora n'était pas satisfaite de sa vie. L'arrivée de Cesare Borgia lui permit de réaliser son souhait : partir du bordel. Le Borgia ne lui avait pas laissé le choix : œuvrer pour lui, ou donner sa vie pour avoir causé l'échec d'un de ses hommes.

Fiora fut chargée de superviser et recruter les autres Templiers. L'une de ses recrues lui causa du souci : Malfatto était un médecin connu pour aimer tuer les courtisanes de Rome. Ayant reçu l'ordre de donner au médecin une lettre d'absolution pour gagner sa fidélité, Fiora tenta de le trouver. Manquant de se faire tuer par Malfatto, elle réussit à lui donner la lettre. Dans la nuit-même, elle ressentit une piqure qui se révéla être celle d'une seringue. A moitié droguée, Fiora réussi à repousser Malfatto mais ce geste la poussa à soupçonne Cesare d'avoir voulu la tuer.

Fiora se mit à établir une liste des meilleurs agents de Cesare et les envoya aux Assassins. Loin d'être repoussée, l'aide de Fiora fut saluée. C'est ainsi que Fiora changa de camp. Elle aida ainsi les Assassins à tuer Rocco Tiepolo, Cahin et Cacha les arlequins, Baltasar da silva et Il Lupo.

Voulant sa vengeance, Fiora se rendit chez Cesare Borgia, invitée par celui-ci. Tendue, elle nia toute implication dans la mort de ses recrues, ainsi qu'une quelconque relation avec les Assassins. la nuit tombée, elle demanda à Giovanni, le fils de Lucrezia, de l'aider à trouver la Pomme d'Eden cachée dans le palais. Alerté par le bruit, Cesare arriva sur les lieux pour trouver Fiora, immobilisée par la puissance de la Pomme. Toute trace d'elle disparut après cette nuit-là.

Voleuse à Rome, Faustina avait toujours vécu dans la misère et avait du se lancer dans le vol pour pouvoir survivre. Vivant avec son frère, elle avait juré de le protéger. Trouvant une paire de ciseaux, ils l'avaient divisé, chacun possédant une lame pour pouvoir sauver l'autre au cas où un danger se présenterait. Pour une raison inconnue, leur promesse a été brisé et depuis Faustina survit seule.

Rocco a été engagé par Cesare pour lui fournir des mercenaires. De toute évidence Rocco fut aussi mercenaire par le passé, aimant se vanter de ses victoires passées. Désormais Rocco ne se bat plus, préférant envoyer ses hommes.

Après la trahison de Fiora "La Courtisane" en 1503, Rocco fut une de ses premières cibles. Sa forteresse fut prise d'assaut par les Assassins. Rocco se retrouva rapidement seul, néanmoins il combattit jusqu'à la fin, obtenant la mort honorable qu'il souhaitait.

Sous ce masque d'Arlequine se cache une membre de la noblesse française. Templière de longue date, en compagnie de son frère et de Fiora "La Courtisane", Caha fut chargée de tuer une personne se faisant passer pour une personne royale. Caha prépara un spectacle de jonglage pour détourner l'attention tandis que son frère assassinait la cible. Alors que la panique gagnait la foule, Caha trancha les gorges des invités avec ses poignards, aidée par Fiora.

Lors de la trahison de Fiora en 1503, Caha et son frère menaient leurs spectacles sans apercevoir les Assassins. Quand ce fut le cas, Caha lança une bombe fumigène pour aider son frère à s'échapper. Mais il fut capturé et tué. Les Assassins trouvèrent Cacha avec le corps de son frère dans les bras, en train de le bercer. L'un d'eux l'abattit d'un carreau d'arbalète.

Membre de la noblesse française, Cahin menait des spectacles avec sa sœur Caha, les utilisant comme mascarade pour mener ses assassinats. Ainsi pendant que sa soeur jonglait, Cahin tuait ses cibles.

Lors de la trahison de Fiora, Cahin devint sa cible et fut tué par les Assassins.

Comtesse de Forli, elle fut mariée à l'âge de 14 ans au neveu du pape Sixte IV, donnant naissance à son premier enfant. Loin d'être une femme soumise, Caterina se fit rapidement connaître pour son caractère bien trempé. Leonardo lui-même l'a désignait comme une personne « aussi dangereuse que belle ». Elle est prête à tout pour sauver Forli et ses enfants. Ezio l'a rencontra brièvement à Forli, alors qu'elle était coincée sur un rocher. Ils se reverront en 1500 à Monteriggioni, Caterina demandant l'aide des Assassins pour protéger sa ville des Borgia – la comtesse usera même de ses charmes pour mieux convaincre Ezio.

Capturée par les Borgias lors de l'attaque de Monteriggioni, l'emprisonnement est loin de calmer la fougue de la jeune femme qui tient tête à sa geôlière, Lucrezia. Sauvée par Ezio, dès qu'elle est remise de sa blessure, Caterina repart à Forli, avouant à Ezio qu'elle ne ressent rien pour lui. Elle continuera à se battre, n'hésitant pas à, par exemple, envoyer des lettres à Cesare Borgia après les avoir frotté sur des lépreux. Elle mourra d'un pneumonie en 1509.

Épouse de Bartolomeo, Pantasilea l'aida à engager des mercenaires dans les environs de Rome. Loin de se reposer sur l'impulsion de son époux, la jeune femme préférait demander son avis à Ezio, ainsi que son soutien. Très stratégique, Pantasilea préférait un plan bien coordonné à la force brute.

En 1503, elle fut enlevée par le baron de Valois comme moyen de pression pour pousser Bartolomeo à abdiquer. Malgré la situation, la jeune femme sut garder son calme jusqu'à ce que le baron menace de lui tirer dessus en voyant qu'il perde l'avantage. Ezio l'assassina à temps, et assura que le plan d'infiltration était de Bartolomeo, soudant le couple. Ils auront quatre enfants : Lucrezia, Isabella, Porzia et Livio Settimo.

Élevée pour servir les desseins de son père, Lucrezia a été mariée trois fois pour servir les intérêts du Pape et donc à des fins politiques. Elle aura une aventure avec un Assassin, Perotto, dont elle tombera enceinte. Les deux amants fous amoureux l'un de l'autre ne pouvant pas poursuivre leur idylle en paix, ils feront le douloureux choix de se séparer définitivement. Perotto emmènera l'enfant avec lui et le sauvera en le recouvrant du fragment d'Eden du Suaire mais sera jugé comme traître par la Guilde des Assassins puis tué. Le petit Giovanni sera adopté par Cesare et appellera sa véritable mère "Tante Crezia" sans jamais connaître la vérité. Il se pourrait que Lucrezia n'ait jamais aimé un autre homme de la même manière que Perotto.

Lucrezia est une femme à ne pas prendre à la légère. Adepte des poisons, elle est tout aussi bien infiniment douée pour en concocter que pour s'en protéger. Sa beauté et sa finesse d'esprit sont des armes redoutables qu'elle sait parfaitement bien utiliser pour parvenir à ses fins. On raconte qu'elle voue un amour quasi-incestueux à son frère Cesare.

Dès l'âge de dix ans, Salai fut apprenti chez Leonard da Vinci et attira tout de suite sa sympathie. En dépit de la générosité de son maître, Salai volait son argent et refusait d'avouer ses larcins. Ce fut cette conduite qui lui donna son surnom, référence à un diable de théâtre.

Pendant le séjour de son maître à Monteriggioni, Salai était chargé de surveiller l'atelier du maître pendant son absence, mais il passait surtout son temps à l'auberge du coin. Salai apprit nombre de détails sur les Assassins, les pièces de l'Eden grâce aux conversations de son maître.

Lors du séjour à Rome, Salai demanda de l'aide à Ezio pour sauver son maître capturé par des gens voulant découvrir le Temple de Pythagore. Malgré ses airs de jeune homme frivole, Salai était très attaché à Leonardo.